人源SPATA22-mCherry哺乳动物融合表达质粒

• 质粒名称：

  pcDNA3.1-CMV-human_SPATA22_mCherry

• 载体骨架：

  pcDNA3.1

• 载体骨架片段大小（bp）：

  6085

• 载体总大小（bp）：

  7174

• 质粒类型：

  哺乳动物荧光表达质粒

• 骨架修饰：

  本载体为pcDNA3.1的改造版本，在限制性酶切位点（Nhe I/Xho I）间插入人源SPATA22基因，并新增了mCherry标签（C端融合，Xho I/Xba I），适用于双荧光标记实验。

• 质粒储存：

  -80°C（长期）或-20°C（6个月内）。

• 质粒浓度：

  1 μg/μl，溶于无菌水。

• 质粒抗性：

  质粒携带AmpR基因，培养时添加70-100 μg/mL氨苄青霉素。

• 培养条件：

  将DH5α/pcDNA3.1菌株接种于含70-100 μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基，37°C、200 rpm振荡培养。

• 克隆用感受态：

  DH5α

• 表达用感受态：

  无

• 高拷贝数/低拷贝数：

  500-700

• 基因/插入片段名称：

  SPATA22 spermatogenesis associated 22 [ Homo sapiens (human) ]

• 插入片段别名：

  POF25; SPGF96; NYDSP20; NYD-SP20

• 质粒来源：

  自行构建

• NCBI Gene ID：

  84690

• 插入长度（bp）：

  1089

• 突变情况：

  密码子优化（序列适合原核表达）；GC序列优化（40-60%）。

• 启动子：

  human cytomegalovirus (CMV) immediate early promoter

• 标签/融合蛋白：

  mCherry

• 5’克隆位点：

  NheI

• 3’克隆位点：

  XhoI

• 5’测序序列：

  CMV-F

• 3’测序序列：

  bGH

载体序列：gcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagtatctgctccctgcttgtgtgttggaggtcgctgagtagtgcgcgagcaaaatttaagctacaacaaggcaaggcttgaccgacaattgcatgaagaatctgcttagggttaggcgttttgcgctgcttcgcgatgtacgggccagatatacgcgttgacattgattattgactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctctctggctaactagagaacccactgcttactggcttatcgaaattaatacgactcactatagggagacccaagctggctagcatgaaacgtagtctgaacgaaaatagtgcacgtagtactgcaggttgcctgccagttccactgttgaaccagaagaagcgcaaccgtcaaccactgaccagcaacccactgaaagatgatagcggcattagcaccccgagcgataactatgattttccaccactgccaactgattgggcatgggaagcagttaatccagaactggcaccagtgatgaagaccgttgatactggtcagattccacatagtgtgagtcgtccactgcgtagtcaggacagtgtgttcaacagcattcagagtaatactggtcgtagtcaaggtggttggagttatcgtgatggcaacaagaacaccagcctgaagacctggaacaagaacgactttaaaccgcaatgtaagcgcaccaacctggttgcgaacgacggcaagaatagttgtccagttagtagtggtgcacaacagcaaaaacagttacgtattccagaaccaccaaatctgagccgcaacaaagaaaccgaactgctgcgccagacccatagtagtaagattagtggttgcactatgcgtggtctggataaaaacagcgcgctgcagaccctgaagccgaacttccagcagaaccagtacaagaagcagatgctggatgatattccggaagataacaccctgaaagaaaccagcctgtatcagctgcagtttaaagaaaaagcgagcagcctgcgcattattagcgcggtgattgaaagcatgaaatattggcgcgaacatgcgcagaaaaccgtgctgctgtttgaagtgttagcggtgctggatagtgcagttaccccaggcccatattatagcaaaacctttctgatgcgcgatggcaagaacaccctgccgtgcgtgttctacgagatcgatcgtgaattaccacgcttaattcgtggtcgtgtgcatcgctgcgtgggcaactacgaccagaagaagaacatcttccagtgtgttagtgttcgtccagcaagtgttagcgaacagaaaacctttcaggcgttcgtgaagattgcggatgtggagatgcagtactatattaacgtgatgaacgaaactggTggcggTggTagtggCggcggTggTagtATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGGATAACATGGCCATCATCAAGGAGTTCATGCGCTTCAAGGTGCACATGGAGGGCTCCGTGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCACCCAGACCGCCAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCCCCCTGCCCTTCGCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCATGTACGGCTCCAAGGCCTACGTGAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTTGAAGCTGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGTGGTGACCGTGACCCAGGACTCCTCCCTGCAGGACGGCGAGTTCATCTACAAGGTGAAGCTGCGCGGCACCAACTTCCCCTCCGACGGCCCCGTAATGCAGAAGAAGACCATGGGCTGGGAGGCCTCCTCCGAGCGGATGTACCCCGAGGACGGCGCCCTGAAGGGCGAGATCAAGCAGAGGCTGAAGCTGAAGGACGGCGGCCACTACGACGCTGAGGTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGCTGCCCGGCGCCTACAACGTCAACATCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCATCGTGGAACAGTACGAACGCGCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAActcgagtctagagggcccgtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttgccagccatctgttgtttgcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgtcctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattctggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcatgctggggatgcggtgggctctatggcttctgaggcggaaagaaccagctggggctctagggggtatccccacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgattagggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattaattctgtggaatgtgtgtcagttagggtgtggaaagtccccaggctccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccaggtgtggaaagtccccaggctccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccatagtcccgcccctaactccgcccatcccgcccctaactccgcccagttccgcccattctccgccccatggctgactaattttttttatttatgcagaggccgaggccgcctctgcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggaggcctaggcttttgcaaaaagctcccgggagcttgtatatccattttcggatctgatcaagagacaggatgaggatcgtttcgcatgattgaacaagatggattgcacgcaggttctccggccgcttgggtggagaggctattcggctatgactgggcacaacagacaatcggctgctctgatgccgccgtgttccggctgtcagcgcaggggcgcccggttctttttgtcaagaccgacctgtccggtgccctgaatgaactgcaggacgaggcagcgcggctatcgtggctggccacgacgggcgttccttgcgcagctgtgctcgacgttgtcactgaagcgggaagggactggctgctattgggcgaagtgccggggcaggatctcctgtcatctcaccttgctcctgccgagaaagtatccatcatggctgatgcaatgcggcggctgcatacgcttgatccggctacctgcccattcgaccaccaagcgaaacatcgcatcgagcgagcacgtactcggatggaagccggtcttgtcgatcaggatgatctggacgaagagcatcaggggctcgcgccagccgaactgttcgccaggctcaaggcgcgcatgcccgacggcgaggatctcgtcgtgacccatggcgatgcctgcttgccgaatatcatggtggaaaatggccgcttttctggattcatcgactgtggccggctgggtgtggcggaccgctatcaggacatagcgttggctacccgtgatattgctgaagagcttggcggcgaatgggctgaccgcttcctcgtgctttacggtatcgccgctcccgattcgcagcgcatcgccttctatcgccttcttgacgagttcttctgagcgggactctggggttcgaaatgaccgaccaagcgacgcccaacctgccatcacgagatttcgattccaccgccgccttctatgaaaggttgggcttcggaatcgttttccgggacgccggctggatgatcctccagcgcggggatctcatgctggagttcttcgcccaccccaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttatcatgtctgtataccgtcgacctctagctagagcttggcgtaatcatggtcatagct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• Nuclear localization of human MEIOB requires its NLS in the OB domain and interaction with SPATA22