RPA1兔多克隆抗体

编号：200000025

已测试应用：IF，WB

反应种属：小鼠

抗体同种型：IgG

实验室：武汉大学罗孟成实验室

文章/专利：MEIOB exhibits single-stranded DNA-binding and exonuclease activities and is essential for meiotic recombination

产品概述

抗体类型：
兔多克隆抗体
宿主：
兔
已测试应用：
IF，WB
反应种属：
小鼠
克隆类型：
多克隆
抗体同种型：
IgG
免疫原：
RLQGISFGMYSAEELKKLSVKSITNPRYVDYLGNPSANGLYDLALGPADSKEVCATCVQDFNNCSGHLGHIDLPLTVYNPFLFDKLYLLLRGSCLSCHMLTCPRAAIYLLISQLRVLEVGALQAVYELERILSRFLEETGDPSAFEIQEELEEYTSKILQNNLLGSQGTHVKNVCESRSKLVAQFWKTHMAAKQCPHCKTGRSVVRKEHNSKLIITYPATVHKKSDQEGTELPEGVPEAPGIDKAQMGKRGYLTPSSAQEHLFAIWKNEGFFLNYLFSGLDDIGPESSFNPSMFFLDFIVVPPSRYRPVNRLGDQMFTNGQTVNLQAVMKDAVLIRKLLALMAQEQKLPCEMTELTIDKENDSSVAIDRSFLGLLPGPSLTDKLYNIWIRLQSHVNIVFDSEMDKLMLEKYPGIRQILEKKEGLFRKHMMGKRVDYAARSVICPDMYINTNEIGIPMVFATKLTYPQPVTPWNV

产品性质

产品状态：
液体
存放说明：
在4°C下装运。4℃短期保存（1-2周）。货到即付。-20°C长期保存。避免冻融循环。
存储溶液：
50%甘油
浓度：
800 ug/ml
纯化方式：
未纯化

产品应用

应用	使用说明
WB	抗体使用比为1：500，3%BSA（TBST配）稀释，4℃孵育过夜，二抗室温1小时
IF	抗体使用比为1：50-1：100，一抗4℃过夜，二抗室温1小时。

靶标信息

NCBI基因ID：
68275
基因描述：
使染色质结合活性。作用于几个过程的上游或内部，包括通过同源重组修复双链断裂；组织内细胞数量的内稳态；以及在子宫内的胚胎发育。位于外侧元和男性生殖细胞核。在呼吸系统中表达；颌下腺;睾丸;心室层。
组织特异性：
颌下腺;睾丸;心室
细胞定位：
染色体定位
Uniprot蛋白ID：
O35134

实验图片

图片1：图1

小鼠精母细胞染色体铺展结果，绿光为RPA1阳性信号，抗体使用比为1：100，一抗4℃过夜。

实验方法

染色体铺展样品处理流程/ 1. 从-80℃取出染色体铺展玻片，放入湿盒中，在常温放置10-15min
2. 用TBS洗玻片三次，每次5min
3. 封闭：用5% 山羊血清将样本完全覆盖，切片需放置于湿盒内
4. 一抗孵育：去除封闭液，直接在样本上滴加TBS缓冲液配制的一抗工作液，样本需完全覆盖，切片需放置于湿盒内，细胞孔板可直接将孔板密封好，孵育过夜
5.一抗清洗：用TBS洗一抗三次，每次5min
6.二抗孵育：在样本上滴加与一抗种属对应的荧光二抗工作液，样本需完全覆盖，避光，常温，孵育1小时
去除二抗工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5 分钟
用缓冲液TBS洗涤2次，每次5分钟
7.封片：加入含DAPI的抗荧光衰减封片剂后，于荧光显微镜下观察并采集图像。 WB实验流程/ 1.组织裂解：把组织在预冷的表面上剪切成细小碎块，然后用液氮或超低温冰箱中冷冻组织30min以上，迅速加液氮研磨，研磨过程尽量控制在1~2min之内，以减少蛋白的降解
2.蛋白变性: 吸取少量蛋白提取液做蛋白浓度测定。向剩余的蛋白提取液的离心管中加入对应体积的5× Loading Buffer（最终工作液为1×)，95℃加热变性10min，待液体完全冷却后置于-20℃保存
3.样本浓度测定：使用BCA法测定蛋白浓度
4.凝胶电泳：蛋白上样，建议总蛋白上样量25μg/孔。上样完成后，进行电泳，浓缩胶建议60V，分离胶120V
5.转膜：建议目的蛋白大于20kDa可选择0.45μm NC膜
目的蛋白小于20kDa可选择0.2μm的NC膜或 0.22μm的PVDF膜。注意使用PVDF膜需先放入甲醇中浸泡1min左右至均匀浸透。 6.封闭：转膜完成后，将膜取出，放入合适的抗体孵育槽中，加入5%的脱脂奶粉室温孵育1h。 7.抗体孵育：使用对应一抗4℃过夜孵育
孵育结束后用TBST Buffer洗涤4次，每次5min
孵育HRP标记的二抗，按照合适比例进行稀释，室温孵育1h。孵育结束后TBST Buffer洗涤4次，每次5min。 8.显影。

文献

MEIOB exhibits single-stranded DNA-binding and exonuclease activities and is essential for meiotic recombination