bend2/gm15262 兔多克隆抗体_武汉珞宾生命科技有限公司

产品概述

抗体类型：
兔多克隆抗体
宿主：
兔
已测试应用：
WB，IP
反应种属：
小鼠，预测可用于人
克隆类型：
多克隆
抗体同种型：
IgG
免疫原：
1-243aa(MESDTDDSHISYDGDELFSEDFGSDIEDTSSFEGLTVDSELEDSDLDSFVEESLSEIEDEYDDDNGADGDEEDDDEDEEEEDCEENLPENLKRFNSSPLALPRLTKRRRSSSPDSFMQLQELLERTNRQITNIYEAVSRIHEFCGVSQMERCRNCDEQLTPAVPAVQDQDNPEGTVLQPVAEAKPAKLDPDADIEPSAGGAQETNTAISSDQPAVEAPPGFQQPVDSTPAHHPSEIPEVIDAS)

产品性质

产品状态：
液体
存放说明：
在4°C下装运。4℃短期保存（1-2周）。货到即付。-20°C长期保存。避免冻融循环。
存储溶液：
50%甘油
浓度：
700 ug/ml
纯化方式：
未纯化

产品应用

应用	使用说明
WB	使用野生型小鼠睾丸样品与bend2敲除小鼠睾丸进行wb检测，抗体稀释比为1:1000，检测大约125kDa的位置条带
IP	使用4 μg bend2

靶标信息

基因名称：
bend2/gm15262
NCBI基因ID：
108168453
基因描述：
该基因编码的蛋白质在c端有两个BEN结构域。这些结构域存在于染色质重组或转录过程中参与蛋白质和DNA相互作用的蛋白质中。选择性剪接导致多个转录物变体
组织特异性：
睾丸高表达
细胞定位：
核定位
Uniprot蛋白ID：
Q8NDZ0

实验图片

图片1：WB	使用野生型小鼠睾丸样品与bend2敲除小鼠睾丸进行wb检测，星号位置为目的条带
图片2：IP	使用4 μg bend2

实验方法

WB实验流程
1.组织裂解：把组织在预冷的表面上剪切成细小碎块，然后用液氮或超低温冰箱中冷冻组织30min以上，迅速加液氮研磨，研磨过程尽量控制在1~2min之内，以减少蛋白的降解
2.蛋白变性: 吸取少量蛋白提取液做蛋白浓度测定。向剩余的蛋白提取液的离心管中加入对应体积的5× Loading Buffer（最终工作液为1×)，95℃加热变性10min，待液体完全冷却后置于-20℃保存
3.样本浓度测定：使用BCA法测定蛋白浓度
4.凝胶电泳：蛋白上样，建议总蛋白上样量25μg/孔。上样完成后，进行电泳，浓缩胶建议60V，分离胶120V
5.转膜：建议目的蛋白大于20kDa可选择0.45μm NC膜
目的蛋白小于20kDa可选择0.2μm的NC膜或 0.22μm的PVDF膜。注意使用PVDF膜需先放入甲醇中浸泡1min左右至均匀浸透。 6.封闭：转膜完成后，将膜取出，放入合适的抗体孵育槽中，加入5%的脱脂奶粉室温孵育1h。 7.抗体孵育：使用对应一抗4℃过夜孵育
孵育结束后用TBST Buffer洗涤4次，每次5min
孵育HRP标记的二抗，按照合适比例进行稀释，室温孵育1h。孵育结束后TBST Buffer洗涤4次，每次5min。 8.显影。
IP实验方案
1.把组织剪切成细小的碎片。取液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 1-2min 之内，以减少蛋白的降解，按照每100-200mg组织加入1ml提前预混含有蛋白酶抑制剂，4℃旋转混匀裂解15min。
2.磁珠预处理：将ProteinA/G Magnetic beads 颠倒或漩涡混匀，取10-15μl ProteinA/G beads至新的EP管中，放在磁力架上，待溶液澄清后，用移液器吸弃保护液。将EP管从磁分离器上取下来，加入1ml IP buffer混匀，瞬时离心后，放置在磁力架上收集磁珠，弃上清，重复2次。将EP管从磁分离器上取下来，加入1mL的3%BSA，置于翻转混合仪4℃封闭1h。将EP管从磁分离器上取下来，加入1ml IP buffer混匀，瞬时离心后，放置在磁力架上收集磁珠，弃上清，重复2次，备用。
3.磁珠、抗原-抗体复合物结合：将含有抗原的300ul样品（总蛋白量200-1000μg，剩余体积用提前预混的含有蛋白酶抑制剂的IP buffer 补至 300ul）中加入目标抗体（0.5-5μg），置于翻转混合仪上 4℃下反应2h或过夜。将上述完成抗体-抗原结合的复合物与备用好的磁珠进行混合，置于4℃下反应2h，根据磁珠与抗体结合的能力可适当延长孵育时间，建议不超过3h，若抗体稀缺可先将抗体与磁珠4℃过夜孵育后，清洗后进行样本孵育。将上述磁珠-抗体-抗原复合物放在磁力架上进行分离，收集上清液，以备后续检测。向离心管中加入1ml IP buffer，置于翻转混合仪上旋转5min，瞬时离心后置于磁力架上分离磁珠，弃上清液
从磁力架上取下离心管，重复洗涤3次，共洗涤4次。
4.抗原洗脱：变性洗脱法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。去除上清后，向其中加入35μl 1XSDS-PAGE Loading Buffer混合均匀，95℃加热10min
磁力架上进行磁性分离，收集上清液进行SDS-PAGE检测
5.wb进行检测，方法同wb检测。