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条件性基因敲除CKO(Conditional Knockout),是指将某个基因的修饰限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段,实现对小鼠基因组的时空特异性修饰。
CKO小鼠利用Cre-loxp系统实现了目的基因在特定组织或发育阶段的空间和时间特异性敲除,相比全身敲除小鼠更具灵活性和精确性。
条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个floxed小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前,该基因表达正常;当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后,可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因,而在其它组织或细胞中该基因表达正常。
优势 | · 具有空间和时间特异性:仅在特定细胞类型或发育阶段敲除目标基因。 · 可减少基因敲除的副作用:避免全身敲除可能带来的胚胎致死或其他非特异性效应。 |
劣势 | · Cre酶的脱靶效应和毒性:可能导致非预期的基因重组或细胞毒性。 · 重组效率不稳定:不同组织中loxp位点的重组效率可能差异较大 · 表达效率差异:Cre酶在不同细胞中的表达水平不一致 |
1、胚胎致死性基因的研究
2、研究靶基因在特定组织或细胞中的功能
3、研究靶基因在特定时期或阶段发挥的作用
1、靶点设计、载体构建、显微注射、首建鼠基因型鉴定
2、提供3只以上F1代小鼠
3、F0代鼠构建4-6个月,F1代小鼠6-8 个月