通常所说的基因敲除（KnockOut,KO）是指完全基因敲除，即在小鼠所有组织细胞中，将靶基因的某些重要外显子或功能结构域、甚至所有外显子敲除掉，导致靶基因的表达缺失。

1.设计并验证sgRNA：选择目标基因，设计并验证特异性sgRNA，质控合格后准备显微注射。

2.显微注射：将Cas9/sgRNA复合物注入受精卵，移植到代孕母鼠。

3.筛选F0代：通过基因型鉴定和表型分析筛选成功敲除的小鼠。

4.繁殖与验证：杂交繁殖获得纯合子，进行深度测序和功能性验证。

完全基因敲除技术通过CRISPR/Cas9精准删除特定基因，广泛应用于基础研究和疾病模型构建。它帮助科学家解析基因功能、研究基因突变对生物体的影响，并为基因治疗提供实验依据。此外，该技术在农业、药物研发等领域也有重要应用，推动了多个学科的发展。